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ELISA實(shí)驗(yàn)“花板”實(shí)驗(yàn)小結(jié)

點(diǎn)擊次數(shù):12688   發(fā)布時(shí)間:2020/12/16 16:45:26

    所謂“花板”,就是空白、陰陽(yáng)性對(duì)照及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,而標(biāo)本孔的OD值卻偏高。“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn),往往會(huì)給實(shí)驗(yàn)者判讀結(jié)果帶來(lái)麻煩。

    為了避免“花板”問(wèn)題的出現(xiàn),降低檢測(cè)的假陽(yáng)性率,獲得更理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)采取下列措施:

    1.在選擇ELISA試劑時(shí),應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便、省時(shí)的試劑。

    2.在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中,所用的儀器及加樣過(guò)程都處于正常狀態(tài)的情況下,步驟均按照各種試劑說(shuō)明書的要求去做,排除實(shí)驗(yàn)所用儀器和操作步驟對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

    3.血液標(biāo)本應(yīng)置于室溫下1-2h,使血液凝固收縮,然后離心檢測(cè)或讓血液過(guò)夜后再檢測(cè)。這樣才能使得血液充分收縮,讓標(biāo)本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽(yáng)性率降至低。

    4.檢測(cè)之,加大離心轉(zhuǎn)速,盡量延長(zhǎng)時(shí)間,使血細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀,讓血細(xì)胞與血清徹底分離。

    5.加樣時(shí)不能加入紅細(xì)胞或纖維蛋白,要按照操作說(shuō)明書去做,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

    6.對(duì)于血清中存在的紅細(xì)胞或纖維蛋白原,可以在加樣離心時(shí)得到控制,同樣也可以通過(guò)適當(dāng)增加洗滌次數(shù)和浸泡時(shí)間來(lái)進(jìn)步減輕或避免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。同樣,對(duì)于血液存在的非特異性的IgG,增加洗滌次數(shù)和延長(zhǎng)浸泡時(shí)間也同樣有效。

    7.封板溫育時(shí),各孔定要封嚴(yán),防止陽(yáng)性標(biāo)本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

    8.孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng),增加了固相載體吸附非特異性蛋白的可能性,也會(huì)造成“花板”。因此,除把握孵育時(shí)間外,在加樣過(guò)程中也應(yīng)嚴(yán)格控制時(shí)間,標(biāo)本較多時(shí)可分批操作。

    9.手工洗板時(shí)應(yīng)注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出,連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。

    10.用洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過(guò)程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

    11.洗液的溫度也會(huì)影響洗板的干凈程度,尤其是冬天溫度過(guò)低時(shí)容易出現(xiàn)“花板”問(wèn)題。

    12.洗液要注滿孔,孔壁洗滌不干凈也易造成“花板”現(xiàn)象。

    13.洗液要盡量新鮮配制,放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易產(chǎn)生絮狀物或渾濁,造成堵孔或花板。

    14.有些廠家的試劑顯色液不穩(wěn)定,使用容易變藍(lán),如在實(shí)驗(yàn)不仔細(xì)檢查,很容易導(dǎo)致“花板”現(xiàn)象的發(fā)生,這也提醒實(shí)驗(yàn)者應(yīng)使用新鮮的顯色液,大程度的保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

    上海恒遠(yuǎn)擁有嚴(yán)格的研發(fā)和驗(yàn)證體系,充分保障了產(chǎn)品的良好性能。通過(guò)嚴(yán)格的篩選,捕獲抗體和檢測(cè)抗體,再進(jìn)行科學(xué)的濃度調(diào)配,形成雙抗體夾心法。通過(guò)精心選擇抗體對(duì)、優(yōu)化緩沖液,來(lái)保證消除基質(zhì)效應(yīng),只識(shí)別目標(biāo)分析物,特異性可靠。試劑盒可以檢測(cè)血清、血漿、培養(yǎng)上清、組織等多種樣本。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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